化橘红提取物可以治疗肝癌吗，看看学术
近来笔者发现发明专利《一种化橘红提取物及其在制备抗癌药物中的应用的制作方法》，其认为化橘红提取物对肝癌大有效果，我们一起来看看：
本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及一种化橘红提取物及其在制备抗癌药物中的应用。
背景技术：
化橘红，即化州橘红，来源本品为芸香科植物化州柚或柚的未成熟或近成熟的干燥外层果皮。具有化痰止咳、治疗风寒咳嗽的作用。
肝癌即肝脏恶性肿瘤，可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织，前者称为原发性肝癌，是我国高发的，危害极大的恶性肿瘤。
现有抗癌报道中多以化橘红药材作为其中一味药材来治疗癌症，并无单独使用化橘红有效部位作为抗癌药物的报道。如专利申请号为201310669278.3的一种治疗肺癌的中药组合物以及申请号为201510164588.9的用于治疗肺癌的中药，其中均以化橘红药材作为其中一味药材来治疗癌症。
因此，以化橘红为基础，研究一种抗癌效果好的抗癌药物具有广阔的市场前景。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中对化橘红中抗癌成分的不足，提供一种化橘红提取物，所述的化橘红提取物具有非常显著的抗癌效果。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种化橘红提取物，包含如下有效成分：川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷。
优选地，所述的化橘红提取物，包含如下重量百分比的有效成分：川陈皮素30～40％；山奈酚20～30％；野漆树苷20～30％。
上述化橘红提取物的制备方法，包含如下步骤：
(1)取化橘红，用乙醇加热回流提取，浓缩提取液得化橘红乙醇提取物；
(2)将化橘红乙醇提取物加水溶解成悬浊液，先用石油醚萃取，弃去石油醚萃取物，再用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取物得化橘红萃取物；
(3)将化橘红萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红提取物。
优选地，步骤(1)中所述的乙醇为体积分数为80～100％的乙醇水溶液；所述的乙醇的用量与化橘红的用量比为8～15mL:1g；所述的加热回流提取的时间为1～3h。
优选地，步骤(2)中先用与悬浊液等体积的石油醚萃取1～3次，弃去石油醚萃取物，再用与悬浊液等体积的乙酸乙酯萃取1～3次，浓缩乙酸乙酯萃取物得化橘红萃取物。
优选地，步骤(3)中硅胶柱层析富集有效成分的具体方法为：将化橘红萃取物上硅胶柱，先用体积比为90:10～87:13的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂；然后再用体积比为82:18～80:20的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位；所述的溶剂A为氯仿，溶剂B为甲醇；
体积比为90:10～87:13的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的3～5倍；体积比为82:18～80:20的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的5～8倍。
优选地，步骤(3)中硅胶柱层析富集有效成分的具体方法为：将化橘红萃取物上硅胶柱，先用体积比为87:13的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂；然后再用体积比为82:18的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位；所述的溶剂A为氯仿，溶剂B为甲醇；
体积比为87:13的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的3倍；体积比为82:18的溶剂A和溶剂B组成的混合溶剂体系的用量为硅胶柱柱体积的8倍。
所述硅胶柱柱体积是指用硅胶装柱后，从柱底到硅胶沉积表面的体积。
优选地，硅胶柱中所用硅胶的重量为化橘红萃取物干重的20～40倍。
上述化橘红提取物在制备抗癌药物中的应用；所述的抗癌药物为抗肝癌药物。
本发明还提供一种来源于化橘红的抗癌药物组合物，其包含如下重量百分比的有效成分：川陈皮素、山奈酚、野漆树苷的重量比为3～4：2～3：2～3；所述的抗癌药物为抗肝癌药物。
有益效果：本发明开发了一种全新的化橘红提取物，所述的提取物具有非常显著的抗肝癌作用，克服了现有技术对化橘红抗癌部位的研究不足；此外，所述的化橘红提取物有效成分以及含量明确，当以该化橘红提取物作为抗肝癌药物使用时，有利于药物的质量控制以及用药安全。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1化橘红提取物的制备
(1)取化橘红，用体积分数为95％的乙醇水溶液加热回流提取1.5h，浓缩提取液得化橘红乙醇提取物；
(2)将化橘红乙醇提取物加水溶解成悬浊液，先用等体积的石油醚萃取，重复萃取3次，弃去石油醚萃取物，再用等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并浓缩乙酸乙酯萃取物得化橘红萃取物；
(3)将化橘红萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红提取物；
所述硅胶柱层析富集有效成分的方法为：将化橘红萃取物上硅胶柱(硅胶柱中所用硅胶的重量为化橘红萃取物干重的30倍，硅胶的规格为200目)，先用体积比为87:13的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为3倍柱体积)进行洗脱除杂；然后再用体积比为82:18的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为8倍柱体积)进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位；所述的溶剂A为氯仿，溶剂B为甲醇。
经检测，所述化橘红提取物中含有重量百分比为37％的川陈皮素、28％的山奈酚以及26％的野漆树苷。
上述成分的含量测定方法为(下同)：使用液相色谱检测，以川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷作为标准品，采用外标法测得。
所述的液相色谱条件为：用Agilent Zorbax SB C18(柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm)为色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.05％的乙酸溶液为流动相B，检测波长为330nm；柱温25℃，流速为1.0mL/min；流动相A：流动相B＝15:85。其中野漆树苷的保留时间为6.3min，山奈酚的保留时间为8.8min，川陈皮素的保留时间为14.4min。
实施例2化橘红提取物的制备
(1)取化橘红，用体积分数为95％的乙醇水溶液加热回流提取1.5h，浓缩提取液得化橘红乙醇提取物；
(2)将化橘红乙醇提取物加水溶解成悬浊液，先用等体积的石油醚萃取，重复萃取3次，弃去石油醚萃取物，再用等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并浓缩乙酸乙酯萃取物得化橘红萃取物；
(3)将化橘红萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红提取物；
所述硅胶柱层析富集有效成分的方法为：将化橘红萃取物上硅胶柱(硅胶柱中所用硅胶的重量为化橘红萃取物干重的30倍，硅胶的规格为200目)，先用体积比为90:10的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为3倍柱体积)进行洗脱除杂；然后再用体积比为82:18的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为8倍柱体积)进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位；所述的溶剂A为氯仿，溶剂B为甲醇。
经检测，所述化橘红提取物中含有重量百分比为35％的川陈皮素、24％的山奈酚以及25％的野漆树苷。
实施例3化橘红提取物的制备
(1)取化橘红，用体积分数为95％的乙醇水溶液加热回流提取1.5h，浓缩提取液得化橘红乙醇提取物；
(2)将化橘红乙醇提取物加水溶解成悬浊液，先用等体积的石油醚萃取，重复萃取3次，弃去石油醚萃取物，再用等体积的乙酸乙酯萃取，重复萃取3次，合并浓缩乙酸乙酯萃取物得化橘红萃取物；
(3)将化橘红萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得化橘红提取物；
所述硅胶柱层析富集有效成分的方法为：将化橘红萃取物上硅胶柱(硅胶柱中所用硅胶的重量为化橘红萃取物干重的30倍，硅胶的规格为200目)，先用体积比为90:10的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为3倍柱体积)进行洗脱除杂；然后再用体积比为80:20的溶剂A：溶剂B组成的混合溶剂体系(用量为8倍柱体积)进行洗脱并收集洗脱部位，即得化橘红有效部位；所述的溶剂A为氯仿，溶剂B为甲醇。
经检测，所述化橘红提取物中含有重量百分比为32％的川陈皮素、21％的山奈酚以及22％的野漆树苷。
实施例4提取物抗癌活性测试
取人肝癌细胞BEL-7404、置于培养基(RPMI 1640培养基)中培养，癌细胞以10×103每孔加入96孔板中，在37℃含5％CO2的培养箱中培养24小时后贴壁后吸去原来的培养基。然后空白组再加入含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基；实验组分别加入含有0.01～100μg/mL待测药物的RPMI 1640培养基；继续培养48h后，再加入浓度5mg/mL的MTT，继续培养4h，吸去上清液，加入100μL DMSO，暗处放置10min，利用酶标仪(Sunrise公司)在570nm下测定吸光值，并根据吸光值计算细胞存活情况，每个处理设6个重复孔。细胞存活率(％)＝ΔOD药物处理组/ΔOD空白组×100。再根据剂量效应曲线计算细胞半抑制浓度(IC50)，结果见表1。实验组的药物分别如下：实验组1使用单独使用川陈皮素；实验组2单独使用山奈酚；实验组3单独使用野漆树苷；实验组4使用川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷按重量比为3:2:2组成的组合物1；实验组5使用川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷按重量比为4:2:2组成的组合物2；实验组6使用川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷按重量比为4:3:3组成的组合物2；实验组7使用实施例1制备得到的化橘红提取物；实验组8使用实施例2制备得到的化橘红提取物；实验组9使用实施例3制备得到的化橘红提取物。
表1.药物对人肝癌细胞BEL-7404的IC50测试结果
从表1中的实验组1～6可以看出，川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷单独使用具有一定的抗肝癌效果，当川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷三者按本发明所述的比例混合时，其抗肝癌效果更显著，这说明川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷三者混合后能产生协同抗癌作用。因此，将川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷三者组合可以作为抗肝癌药物使用。
从表1中的实验组7～9可以看出，本发明所述的化橘红提取物具有非常显著的抗肝癌作用，其抗肝癌作用要强于其中任意一种单体的抗肝癌作用，这是由于其中的有效成分川陈皮素、山奈酚以及野漆树苷产生协同抗肝癌的作用。由此可见，本发明首次开发出了具有非常优异抗肝癌效果以及有效成分明确的化橘红提取物，该提取物可以作为抗肝癌药物使用。
上次听说化橘红有一定的概率对乙肝有效，可能就是化橘红的一些成分有作用。
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